Identifikace a studium funkce mikroRNA s prediktivním a prognostickým významem u pacientů s kolorektálním karcinomem

• Autoři: SLABÝ Ondřej; HRSTKA Roman; SOBKOVÁ Kateřina; DUBSKÁ Lenka; SVOBODA Marek; OVESNÁ Jaroslava; VYZULA Rostislav
• Rok publikování: 2008
• Druh: Článek ve sborníku
• Konference: Edukační sborník. XXXII. Brněnské onkologické dny s XXII. Konferencí pro sestry a laboranty. (ISBN: 978-9780-86793-11-5)
• Fakulta / Pracoviště MU: Lékařská fakulta
• www: http://www.mou.cz/mou/upload/Rubriky/BOD/Sbornik_BOD2008.pdf
• Obor: Onkologie a hematologie
• Klíčová slova: microRNA; colorectal cancer; profiling; p53; apoptosis
• Popis: MikroRNA (miRNA) tvoří velkou skupinu krátkých nekódujících RNA post-transkripčně regulujících genovou expresi. Na základě schopnosti miRNA regulovat translaci onkogenů a nádorových supresorů, lze předpokládat jejich funkční zapojení do procesů kancerogeneze. Ve výzkumu nádorů tlustého střeva a konečníku již byly zveřejněny práce definující profily exprese miRNA odlišující nádorovou tkáň od zdravé střevní sliznice či schopnost vybraných miRNA vykazovat funkci nádorového supresoru nebo onkogenu. V naší studii jsme metodou Real-Time PCR sledovali vztah vybraných miRNA ke klinicko-patologickým charakteristikám kolorektálního karcinomu (CRC) na souboru 29 pacientů. Nejvyšší hladiny v nádorové tkáni oproti normálnímu střevnímu epitelu vykazovala miR-21 (p=0,0001), kterou jsme pozitivně asociovali také s postižením lymfatických uzlin (p=0,027) a rozvojem vzdálených metastáz (p=0,009). K objasnění funkce miR-21 v patogenezi CRC jsme provedli in vitro studii na buňkách kolorektálního karcinomu DLD1 a SW837. Za tímto účelem jsme do buněk transientně transfekovali 2-O-methylované oligonukleotidy, anti-miRNA-21, což vedlo k reprodukovatelnému poklesu hladin miR-21 na 12%-15% oproti expresi v kontrolních buňkách, do kterých byl transfekován 2-OMe-EGFP. Pro normalizaci dat byla použita malá jaderná U6B RNA (RNU6B), jejíž exprese nebyla transfekcí ani v jednom případě ovlivněna. Transfekce anti-miRNA-21 vedla k přibližně 30% poklesu proliferace obou testovaných linií při měření MTT testem. V současné době testujeme vliv anti-miRNA-21 na senzitizaci buněk k panelu cytostatik (5-fluorouracil, irinotekan, oxaliplatina), její vliv na buněčný cyklus průtokovou cytometrií a invazivní vlastnosti pomocí matrigelového testu invazivity. Zdvojnásobili jsme zkoumaný soubor pacientů a doplnili ho o další klinicko-patologické údaje včetně parametrů přežití. Věříme, že naše práce je dalším příspěvkem ke studiu funkcí miRNA v regulaci apoptózy, buněčné proliferace a diferenciace během patogeneze kolorektálního karcinomu. Práce byla podpofiena grantem IGA MZ ČR NR/9076-4 a výzkumným záměrem MZ0MOU2005.