Fenoloxidáza hmyzu - jak ovlivnit činnost enzymu?
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2009 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Fenoloxidáza (PO) je základní složkou fenoloxidázové kaskády, která kromě enzymu PO zahrnuje molekuly rozpoznávající antigenní částice charakteristické pro potenciální patogeny a řadu serinových proteáz zprostředkujících přenos signálu o přítomnosti antigenu a následnou aktivaci PO. Ta spočívá v naštěpení prekurzoru profenoloxidázy (pPO) syntetizovaného hemocyty. Hmyzí PO se účastní mnoha imunitních i neimunitních dějů, jako je detekce a agregace proniklých bakterií, nodulace, enkapsulace, sklerotizace a pigmentace kutikuly nebo tvorba koagulační zátky a hojení zranění. Činnost PO je ovlivňována na třech základních úrovních: během syntézy pPO, aktivace pPO a následně regulací aktivované PO. Spektrofotometrickým měřením aktivity PO u larev a kukel Galleria mellonella jsme prokázali, že se hladina PO mění během vývoje a to jak v hemolymfě, tak v kutikule. Syntézu pPO ovlivňuje také narušení metabolismu kyseliny arachidonové po použití inhibitorů biosyntézy eikosanoidů (IBE). Indometacin způsobuje znatelný pokles aktivity PO i celkové pPO. Naproti tomu phenidon má, zdá se, při vyšších koncentracích pozitivní vliv na aktivitu PO. V in vitro testech se uplatňují především faktory ovlivňující aktivaci pPO. Mezi hlavní z nich patří teplota a délka inkubace. Za pokojové teploty dochází již během 5 min ke spontánní aktivaci pPO. Té zabraňují pouze teploty do 0 C. Celková hladina PO detekovatelná po chemické aktivaci veškeré přítomné pPO metanolem není teplotou ani délkou inkubace ovlivněna. Činnost aktivovaného enzymu pak závisí především na dostupnosti a druhu substrátu. Pro PO jsou nejvhodnějšími substráty difenoly, např. DOPA nebo hydrochinon. Hydrochinon se na rozdíl od DOPA neváže na pevné tkáně a může být proto použit i k detekci kutikulární PO. Místo substrátu se mohou do aktivního místa enzymu vázat také inhibitory jako fenylthiomočovina, které úplně blokují aktivitu PO. Tato práce byla podpořena grantem GAČR 206/09/P470. |
| Související projekty: |