Isolation of PCR-ready DNA from lyophilisates of <I>Trichophyton</I> fungi and from phages of <I>Staphylococcus aureus</I> using magnetic microspheres
| Název česky | Izolace DNA v kvalitě pro PCR z lyofilizovaných vzorků Trichophyton a z bykteriofágů Staphylococcus aureus pomocí magnetických mikročástic |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2008 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | 10 th International Symposium on Hyphenated Techniques in Chromatography and Hyphenated Chromatographic Analyzers & 10 th International Symposium on Advances in Extraction Techniques 2008 |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| www | http://www.ordibo.be/htc/ |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | fungi; Trichophyton; bacteriophages; Staphylococcus aureus; nonporous magnetic hydrophilic microspheres; P(HEMA-co-EDMA) |
| Popis | Cílem této práce byla izolace DNA v kvalitě vhodné pro PCR z lyophilizovaných buněk (spor) Trichophyton a z malých objemů fágových lyzátů fágů Staphylococcus aures. Extrakce DNA amplifikovatelné v PCR z mikroskopických hub je obtížná, protože dermatofyty obsahují polysacharidy a chitinovou buněčnou stěnu. DNA v kvalitě vhodné pro PCR izolovaná z buněčných lyzátů byla přečištěna pomocí magnetického nosiče pokrytého karboxylovými skupinami. Adsorbovaná DNA byla eluována do TE pufru a použita do PCR. Pro amplifikaci DNA Trichophyton byly využity primery ITS4 a ITS. DNA byla izolována z lyofilizátů bez kultivace buněk (spor) a současně byl eliminován i vliv inhibitorů PCR, přítomných v mediu. DNA v kvalitě vhodné pro PCR byla izolována s využitím magnetického nosiče i z bakteriofágů Staphylococcus aureus. Lyzáty bakteriofágů f77 a f53 byly podrobeny působení RNázy A a proteinázy K. Fágová DNA byla použita v PCR pro identifikaci fága. |
| Související projekty: |