Stanovení adeninových nukleotidů a koenzymů za pomocí CZE s využití on-line prekoncentrační techniky field enhanced stacking
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Adeninové nukleotidy patří mezi centrální metabolity komplexní metabolické sítě buněk. Jejich stanovení má podstatný význam pro metabolomické studie neboť jejich hladina (spolu s koenzymy) odráží energetický stav buňky, který je vysoce dynamický v závislosti na fyziologických podmínkách během buněčného růstu a smrti. Byla vypracována metoda pro stanovení adeninových nukleotidů (ATP, ADP, AMP) a koenzymů (NAD+, NADH , NADP+, NADPH) pomocí kapilární zónové elektroforézy v kombinaci s on-line prekoncentrační technikou field enhanced stacking. Separace těchto analytů probíhala v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 75 um, přičemž byl použit 100 mM amoniumuhličitanový základní elektrolyt o pH 9,6. Pro zvýšení selektivity byl do základního elektrolytu přidán beta-cyklodextrin do výsledné 5 mM koncentrace. Vzorky připravené rozpuštěním v deionizované vodě byly do kapiláry nadávkovány hydrodynamicky tlakem 35 mbar po dobu 20 s. Separace byla prováděna při napětí 18 kV (pozitivní polarita). Detekce analytů byla provedena pomocí UV absorpce při vlnové délce 260 a 340 nm. Díky použití uvedené prekoncentrační techniky došlo ke zvýšení citlivosti až 10,5 x oproti běžným CZE metodám s klasickým dávkováním (3s při 50 mbar). Vyvinutá metoda byla aplikována na bezbuněčný extrakt bakterie Paracoccus denitrificans, kde byly zaznamenány koncentrační změny AMP, ADP, NAD+ a NADP+ s prodlužující se dobou aktivity respiračního řetězce. |
| Související projekty: |