Vyuziti eliminacni voltametrie pro analyzu nukleovych kyselin
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Časopis lékařů českých |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Elektrochemie |
| Klíčová slova | Sensor; Biosenzor; DNA; Oligonucleotid; Elimination voltammetry with linear scan; |
| Popis | Od popsání struktury DNA uplynulo více jako 50 let, avšak DNA zůstává stále jednou z nejstudovanějších biologických molekul. O tomto faktu svědčí, že v roce 2004 bylo publikováno více než 30 tis článků věnujících se studiu DNA. V analýze DNA se uplatňuje celá řada metod a postupů. V současné době stále nejvíce využívanou metodou detekce DNA je elektroforetická separace na agarózových a nebo polyakrylamidových gelech. Moderní technologie umožnily rozpoznání sekvence genomů řady organismů včetně člověka a nyní jsou takto získané poznatky aplikovány do studia lidských nemocí a zdraví. Je potřebné hledat nové postupy umožňující rychlou a senzitivní analýzu DNA. Možnou alternativu představují elektrochemické metody. Elektrochemické chování nukleových kyselin poprvé publikoval Paleček v roce 1960 v časopise Nature. Od té doby je problematice elektroanalýzy nukleových kyselin věnována značná pozornost. Elektrochemie dnes nabízí postupy v oblasti konstrukce levných a rychlých biosenzorů. Navrhované biosenzory jsou navrhovány pro detekci řady závažných genetických, ale i na genech závislých onemocnění (jako například nádorová onemocnění). Nedávno byla eliminační voltametrie úspěšně použita pro senzitivní analýzu nukleových kyselin. V našich experimentech bylo elektrochemické měření uskutečněno na přístroji AUTOLAB (EcoChemie, Holandsko) ve spojení s VA-Stand 663 (Metrohm, Švýcarsko). Pomocí eliminační voltametrie byl zkoumán vliv změny obsahu purinových a pyrimidinových bází v řetězci DNA. Byl sestaven nový EVLS DNA biosenzor, založeným na technice adsorptivní přenosové rozpouštěcí voltametrie (AdTSV) a eliminační voltametrie s lineárním scanem (EVLS). V našich experimentech byla DNA adsorbována (5 ľl) na povrch pracovní visící rtuťové kapkové elektrody po dobu 240 s. Všechny nízkomolekulární a neadsorbované molekuly DNA byly z povrchu pracovní elektrody odstraněny oplachem v destilované vodě a použitém pufru. Pro tento účel jsme zvolili sérii oligonukleotidů (ODNs), které měly ve své primární struktuře různý počet bází. V dalších experimentech byla sledována závislost elektrochemického signálu ODNs na měnící se rychlosti polarizace (5, 10, 25, 50, 100, 200, 400, 800, 1 400 a 2 400 mV/s). Pomocí námi vyvinutých unikátních postupů bylo možné rozlišit změny v primární struktuře DNA s ohledem na záměnu jediné nukleotidové báze v řetězci DNA. Použitý postup umožnil stanovit DNA ve velmi nízkých koncentracích v řádech desítek nM. Elektrochemická analýza DNA stále představuje vhodný nástroj pro konstrukci jednoduchých, spolehlivých a přitom velice levných zařízení. |
| Související projekty: |