Electrophoretically mediated microanalysis for simultaneous on-capillary derivatization of standard amino acids followed by micellar electrokinetic capillary chromatography with laser-induced fluorescence detection
| Název česky | Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza pro současnou derivatizaci standardních aminokyslin v kapiláře následovaná micelární elektrokinetickou kapilární chromatografií s laserem-indukovanou fluorescenční detekcí |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2017 |
| Druh | Článek v odborném periodiku |
| Časopis / Zdroj | Journal of Chromatography A |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Doi | http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2017.03.080 |
| Obor | Biochemie |
| Klíčová slova | Capillary electrophoresis; Electrophoretically mediated microanalysis; Amino acids; On-capillary derivatization; Human embryo metabolomics; Transverse diffusion of laminar flow profiles |
| Popis | Aminokyseliny jsou pro život nezbytné biomolekuly, které jsou zapojeny v mnoha biochemických procesech. Jelikož jejich dynamické změny odráží aktuální fyziologii buňky/organismu, stanovení těchto změn poskytuje cenné informace vypovídající o mnoha fyziologických a patofyziologických stavech. Citlivé stanovení aminokyselin je nejčastěji spojováno s jejich derivatizací, jež bývá pracná, časově náročná a obtížně standardizovatelná. Kapilární elektroforéza ale umožňuje automatické dávkování a míchání reaktantů, inkubaci reakční směsi, separaci a detekci produktů reakce v jednom procesu probíhajícím přímo v kapiláře. Elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza (EMMA) vyniká oproti ostatním stategiím míchání reaktantů v kapiláře vyšší účinností míchání. V tomto článku je představena optimalizace metody EMMA pro současnou derivatizaci standardních aminokyselin naftalen-2,3-dikarboxaldehydem/NaCN a její aplikace pro cílenou metabolomiku lidských embryí. K tomuto účelu byly vyvinuty nové separační podmínky se složením základního elektrolytu 73 mM dodecylsulfát sodný, 6.7 % (v/v) 1-propanol, 0.5 mM (2-hydroxypropyl)-beta-cyklodextrin a 135 mM kyselina boritá/hydroxid sodný (pH 9.00). Optimalizovaná metoda EMMA byla nakonec srovnána s principiálně odlišnou metodou míchání - příčnou difuzí v laminárním toku - a ukázala se také vhodnou pro analýzu lidské plazmy. |
| Související projekty: |