Telomeráza je jedinečnou reverzní transkriptázou eukaryotických organizmů, která
přidává krátké opakující se sekvence DNA na konce lineárních chromozomů (telomery), čím je nejen odlišuje od dvojřetězcových zlomů DNA, ale též
předchází ztrátě genetické informace při replikaci a udržuje buněčnou
proliferaci. Díky její schopnosti imortalizovat rakovinové a kmenové buňky je
telomeráza předmětem intenzivního biomedicínského výzkumu již více než 15 let. V posledních pěti letech se však začaly hromadit důkazy, že telomeráza vykonává
i více dalších, doposud málo prozkoumaných aktivit, které nejsou závislé
na její interakci s telomérami(1-5). Vzhledem k tomu, že tyto aktivity ovlivňují
esenciální buňkové děje, jakými jsou apoptóza, genová exprese, funkce
mitochondrií, nebo odpověď na poškození DNA a mohou přispívat k nádorové
transformaci buněk, před vědci se otevřela nová, perspektivní oblast výzkumu.

Cílem započaté diplomové práce je přispět k objasnění působení a regulace
telomerázy v rostlinné buňce prostřednictvím vyhledání proteinů interagujících s její katalytickou podjednotkou, TERT (z angl. telomerase reverse transcriptase). K tomuto účelu bude použita vysokovýkonná metoda tandemové afinitní purifikace (TAP),která umožní izolaci značeného proteinu TERT s jeho přirozeným okolím přímo z celkového proteinového extraktu rostlinného materiálu. Kromě TERT s plnou délkou budou mapovaní interakčních partnerů podstoupené také vybrané zkrácené varianty proteinu za účelem identifikace proteinových domén, které jsou zodpovědné za pozorovanou interakci. Tento přístup navíc umožňuje zachytit vzájemné interakce mezi doménami, které mohou indikovat schopnost TERT tvořit dimery nebo vyšší oligomery. Identifikace interakčních partnerů TERT je předpokladem jak k pochopení molekulárních principů mnohostranných aktivit telomerázy v buňce, tak i k odhalení mechanizmů posttranslační regulace tohoto enzymu.

Publications